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Femto-Sensitive ECL Solution是一種基于Luminol的高靈敏性、非放射性化學(xué)發(fā)光底物，用于檢測(cè)免疫印跡中固定在膜上的辣根過(guò)氧化物酶（HRP），可檢測(cè)飛克級(jí)別的抗原。持續(xù)發(fā)光時(shí)間長(zhǎng)達(dá)6個(gè)小時(shí)，可反復(fù)曝光于X射線膠片或化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)，以獲得最佳的結(jié)果或剝離的免疫檢測(cè)試劑和再探測(cè)。

 Femto-Sensitive ECL Solution可用于Western Blot，Northern Blot, Southern Blot, Dot Blot等實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)HRP標(biāo)記的探針或者抗體。

Preparation使用說(shuō)明：

1. 常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記抗體或核酸探針?lè)跤?、洗膜。注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。核酸雜交膜用HRP標(biāo)記探針雜交，洗膜。

2. 洗滌膜上的 HRP 標(biāo)記二抗時(shí)，新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液Luminol/Enhancer solution 和 Stable Peroxide Buffer 1:1混合，放置使之升到室溫否則會(huì)減弱熒光強(qiáng)度。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低。

3. 用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入并與發(fā)光工作液(0.125ml發(fā)光工作液/cm膜)充分接觸。室溫孵育 3-5分鐘，準(zhǔn)備立即壓片曝光。孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)不會(huì)增加靈敏度，有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過(guò)程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過(guò)少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，也會(huì)導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。

4. 用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。

5. 在 X 光膠片暗盒內(nèi)面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將雜交膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來(lái)*包裹雜交膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，最好蛋白帶面向上。

6. 在黑暗中放入X光膠片，分別曝光不同的時(shí)間如數(shù)秒到數(shù)分鐘顯影沖洗。