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qPCR熒光定量PCR儀的試驗設(shè)計評價步驟說明
  熒光定量PCR的檢測離不開熒光定量PCR試劑和qPCR熒光定量PCR儀,儀器由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成,用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實時設(shè)備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù)。
  
  對于熒光定量PCR儀的評價,相信大家一定是不知道的。熒光定量PCR儀涉及很多溫度、光電信號等,專業(yè)性評估,還有就是不知道從哪里入手。今天我們梳理下在核酸檢測實驗室中如何通過試驗來評價熒光定量PCR儀。
  
  qPCR熒光定量PCR儀的試驗設(shè)計:
  
  一、試驗準備
  
  1、有證標準物質(zhì):國內(nèi)外有證標準物質(zhì),標準物質(zhì)類型為質(zhì)粒DNA或RNA。不推薦使用自制沒有進行定量的質(zhì)控品。
  
  2、熒光染料:可以選用試劑盒自帶的ROX染料或購買標準熒光染料。
  
  3、熒光定量PCR方法:需要使用經(jīng)過驗證過的熒光定量方法,擴增效率90%-110%(越接近100%越好);R2大于0.99;檢測限應低于10copies/反應。
  
  4、反應體系:質(zhì)量高口碑好的反應體系。
  
  5、耗材:儀器推薦使用的專用于熒光定量PCR的耗材。
  
  6、反應條件:常規(guī)熒光定量PCR反應條件,普通模式,40個循環(huán)。不建議使用快速模式和預擴增反應條件。
  
  二、重復性試驗
  
  選擇高中低濃度標準物質(zhì)進行檢測(推薦濃度為5000copies/反應、500copies/反應和50copies/反應),每個濃度至少5次重復,樣品管隨機放置在反應板中心和邊緣的不同位置。Ct值變異系數(shù)不大于3%。
  
  如果qPCR熒光定量PCR儀檢測中使用雙重或多重熒光檢測,可設(shè)計如用FAM探針擴增用VIC通道檢測,檢測結(jié)果不應該有高于閾值線的熒光信號。

上海睿玥實驗器材有限公司主營產(chǎn)品:全自動熔點測定儀,梯度PCR基因擴增儀,平行反應合成儀
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